neuro-2a（N2A）小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞

細(xì)胞介紹

克隆Neuro-2A是由R.J.Klebe和F.H.Ruddle經(jīng)A株白鼠的自生腫瘤建立。該細(xì)胞產(chǎn)生大量微管蛋白，此蛋白在神經(jīng)細(xì)胞中起應(yīng)答軸漿流動(dòng)的收縮系統(tǒng)作用。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤

2） 形態(tài)：阿米巴樣干細(xì)胞

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

細(xì)胞凋亡的早期形態(tài)學(xué)改變是核染色質(zhì)濃聚、固縮,聚集在核膜周邊，然后是胞漿濃縮、胞膜起泡,繼而細(xì)胞核裂解成若干碎片，細(xì)胞膜將胞質(zhì)和染色質(zhì)斷片包裹，胞漿內(nèi)形成多個(gè)膜結(jié)構(gòu)尚完整的“小泡"及 “凋亡小體" (apoptoticbody)。這不同于細(xì)胞壞死的細(xì)胞腫脹、胞膜破裂、細(xì)胞崩解。

       根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征，至今為止，已經(jīng)設(shè)計(jì)了許多不同的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法。

       一、光學(xué)顯微鏡觀察

       凋亡細(xì)胞的主要特征為核染色質(zhì)致密深染，形成致密質(zhì)塊，有時(shí)可碎裂。在HE染色的組織切片中細(xì)胞體積縮小，胞質(zhì)致密、嗜酸性染色增強(qiáng)，并可形成凋亡小體。在組織中凋亡細(xì)胞常以分散單個(gè)形式存在，凋亡細(xì)胞與周圍細(xì)胞分離，不引起炎癥反應(yīng)。

本方法簡(jiǎn)便易行，但在細(xì)胞密集的組織中對(duì)于改變不典型的細(xì)胞判斷較困難，常缺乏較為特征的指標(biāo)，具有較強(qiáng)的主觀性，重復(fù)性差。本方法可用于調(diào)亡現(xiàn)象的初步觀察，作為分析指標(biāo)之一。

       檢測(cè)方法：細(xì)胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物鏡下觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)改變，結(jié)合顯微測(cè)量工具可作凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)。

       二、視頻時(shí)差顯微技術(shù)

       此方法用于細(xì)胞培養(yǎng)，通過(guò)相差顯微鏡可動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞凋亡的變化過(guò)程，尤其是觀察細(xì)胞表和外形的變化。凋胞與基質(zhì)分離，胞體變圓、收縮、出泡，有的細(xì)胞拉長(zhǎng)，出現(xiàn)釘狀突起，特續(xù)數(shù)小時(shí)后細(xì)胞膜破裂，細(xì)胞溶解，通過(guò)連續(xù)觀察，本方法可養(yǎng)壑培養(yǎng)中的凋亡細(xì)胞，但不能用于病理組織。

       檢測(cè)方法：收集2×105細(xì)胞/ml培胞，置于多孔培養(yǎng)板，加入凋亡誘導(dǎo)劑，在帶有自動(dòng)攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞的動(dòng)態(tài)改變，每隔分鐘30秒作序列攝影，連續(xù)24小時(shí)。如同進(jìn)進(jìn)行熒光染色，可參熒光晃微鏡下觀察和攝影。

       三、電子顯微鏡觀察

雖然光學(xué)顯微鏡下可以看見(jiàn)胞膜起泡現(xiàn)象和凋亡小體,但凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化大多發(fā)生在超微結(jié)構(gòu),因此用光鏡觀察難以令人滿意,而透射電鏡可清楚地觀察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)在凋亡不同時(shí)期的變化。電鏡形態(tài)學(xué)觀察是迄今為止判斷凋亡經(jīng)典、可靠的方法,被認(rèn)為是確定細(xì)胞凋亡的金標(biāo)準(zhǔn)。

       缺點(diǎn)：

       (1)只能定性,不能定量;

       (2)標(biāo)本處理過(guò)程復(fù)雜,設(shè)備相對(duì)昂貴,對(duì)檢查者的技術(shù)水平要求較高,不適于大批標(biāo)本檢測(cè);

       (3)在組織切片上進(jìn)行電鏡觀察時(shí),有時(shí)凋亡很難與正常細(xì)胞有絲分裂相鑒別,因?yàn)閮煞N情況下都可出現(xiàn)染色質(zhì)濃聚。如同時(shí)進(jìn)行熒光染色,可彌補(bǔ)電鏡檢查的不足。

       檢測(cè)方法：透射電鏡標(biāo)本經(jīng)戊二醛和餓酸雙重固定，丙酮脫水，環(huán)氧樹(shù)脂包埋，超薄切片，醋酸枸椽酸電子又重染色，透射電鏡觀察。掃描電鏡標(biāo)本經(jīng)戊二醛和餓酸雙重固定，乙醇逐級(jí)脫水，CO2臨界點(diǎn)干燥，真空噴金，掃描電鏡觀察。

       四、流式細(xì)胞技術(shù)

       流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡細(xì)胞是通過(guò)檢查其光射特征及熒光參數(shù)時(shí)行的。細(xì)胞穿過(guò)流式細(xì)胞儀的激光束集點(diǎn)時(shí)使激光發(fā)生散射，分析散射光可以提供細(xì)胞大小及結(jié)構(gòu)的信息。散射光包括前向散射光和左向角散射光兩種，前向散射光的強(qiáng)度與細(xì)胞大小、體積相產(chǎn)，右向角射光的強(qiáng)度與細(xì)胞結(jié)構(gòu)的析射性、顆粒性（granu-larity）有關(guān)。

       細(xì)胞凋亡過(guò)程中出現(xiàn)的形態(tài)改變?nèi)缂?xì)胞皺縮、胞膜起泡、核濃縮和碎裂等可以使光散射特性發(fā)生改變。早期凋亡細(xì)胞主要表現(xiàn)為前向散射光減弱而右向角散射光增強(qiáng)或不變，前者反映了細(xì)胞的皺縮，后者反映了細(xì)胞的核逐縮及碎裂。晚期凋亡細(xì)胞的前向散射光和右向角散射光均減弱。

       由于光散射牧場(chǎng)生并非凋亡細(xì)胞的特異性指標(biāo)，細(xì)胞的機(jī)械性損傷和細(xì)胞壞死也可以使前向散射光減弱。因此，只有將光散射特性的檢測(cè)與熒光參數(shù)的檢測(cè)結(jié)合起來(lái)才能準(zhǔn)確地辨認(rèn)凋亡細(xì)胞。

       細(xì)胞凋亡過(guò)程中核酸內(nèi)切酶在DNA分子核小體間的降解，導(dǎo)致小分子DNA漏出，核DNA含量下降，細(xì)胞熒光染色后作流式細(xì)胞儀分析，可以發(fā)現(xiàn)在DNA直方圖上正常二倍體細(xì)胞的Go/G1峰前出現(xiàn)一個(gè)亞二倍體峰（xub-G1峰，即AP峰--apoptotic peak）,代表凋亡細(xì)胞。

       根據(jù)此亞二倍體峰可以計(jì)算凋亡細(xì)胞的百分率。此外，流式細(xì)胞術(shù)還可以通過(guò)測(cè)定線粒體膜的電位、溶酶體質(zhì)子泵的活性及細(xì)胞DNA/總蛋白質(zhì)比例等方法辨認(rèn)凋亡細(xì)胞。

       檢測(cè)方法：獲取密度1×106細(xì)胞/ml左右的細(xì)胞懸液，精洗，固定，熒光染料染色，上流式細(xì)胞儀分析。

neuro-2a（N2A）小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞 NE-4C

小鼠胰島β細(xì)胞株 Min6

小鼠B細(xì)胞淋巴瘤 A20

小鼠肝癌細(xì)胞 Hepa1-6

小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞 Bv-2

小鼠乳腺癌細(xì)胞 4T1

小鼠胚胎瘤細(xì)胞 ATDC5

小鼠胰腺癌細(xì)胞 PANC02

小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞 GL261

小鼠肺癌細(xì)胞 LLC

小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞 K7M2wt

小鼠乳腺癌細(xì)胞 EMT6

小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞 HT22

小鼠小腸內(nèi)分泌細(xì)胞系 STC-1

小鼠乳腺上皮細(xì)胞 EpH4-Ev

小鼠肝細(xì)胞 AML12

小鼠膀胱癌細(xì)胞 MB49

小鼠巨噬細(xì)胞 Ana-1

小鼠腎小球系膜細(xì)胞 SV40-MES-13

小鼠胚胎肝細(xì)胞 BNLCL.2

小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞 P815

小鼠腎癌細(xì)胞 Renca

小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤瘤株 G422

小鼠骨髓瘤細(xì)胞 SP2/0

小鼠精原細(xì)胞系 GC-1spg

小鼠腎髓質(zhì)細(xì)胞 mIMCD-3

小鼠前列腺癌細(xì)胞 RM-1

小鼠宮頸癌細(xì)胞 U14

小鼠卵巢癌細(xì)胞 ID8

小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞 L-WRN

小鼠胰腺腺泡癌細(xì)胞 266-6

小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞　 OP9

小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞 MC3T3-E1

人子宮頸表皮癌細(xì)胞MS751 MS751

小鼠肝癌 H22

小鼠淋巴瘤細(xì)胞 EL4

小鼠骨樣細(xì)胞 MLO-Y4

小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞 MS1

豬腎傳代細(xì)胞 IBRS-2

恒河猴胚腎細(xì)胞 FRHK-4

恒河猴腎細(xì)胞 LLC-MK2

昆蟲(chóng)卵巢細(xì)胞 Sf9

科研C6/36白紋伊蚊細(xì)胞 C6/36

猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞 RF/6A

雞肝癌細(xì)胞 LMH

倉(cāng)鼠腎成纖維細(xì)胞 BHK-21

非洲綠猴腎細(xì)胞 VEROC1008(E6)

豬腎細(xì)胞系 PK15

牛腎細(xì)胞 MDBK

非洲綠猴腎細(xì)胞 VERO

豬睪丸細(xì)胞系 ST

貓腎細(xì)胞 CRFK

犬腎細(xì)胞 MDCK-II

恒河猴腎細(xì)胞MA-104 MA-104

絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞 B120-8

豬內(nèi)皮細(xì)胞PED PED

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 CHO-K1

雞胚胎成纖維細(xì)胞 UMNSAH/DF-1

中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞CHL CHL

倉(cāng)鼠肺細(xì)胞 V79

豬肺泡巨噬細(xì)胞 3D4/21

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 CHO

雞淋巴瘤細(xì)胞 DT40

猴腎細(xì)胞 MARC145

鴨子胚胎成纖維細(xì)胞 Duckembryo

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(懸浮 CHO-S

果蠅胚胎細(xì)胞S2 S2

豬腸上皮細(xì)胞 IPEC-J2

 豬鼻甲黏膜成纖維細(xì)胞 PT-K75

豬肺泡巨噬細(xì)胞 3D4/21

 豬腎細(xì)胞 PK-15