NCI-H441 人肺腺癌細胞培養(yǎng)手冊

貨號：WS0395H

細胞介紹

NCI-H441建系于1982年（A.F.Gazdar，etal.)。該細胞分離自一名肺腺癌患者的心包液。該細胞能在半固體瓊脂糖中形成克隆，并能表達肺泡表面活性蛋白A。該細胞在有血清培養(yǎng)基中倍增時間為58小時，在無血清培養(yǎng)基中倍增時間為99-138小時。

細胞特性

1） 來源：肺癌

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數(shù) 

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

三、 細胞傳代操作步驟

A. 貼壁細胞傳代

1. 準備：吸棄舊培養(yǎng)基。

2. 沖洗：沿培養(yǎng)瓶側(cè)壁緩慢加入PBS等沖洗液，輕輕晃動后吸棄，去除殘留血清。

3. 消化：加入預熱的胰酶（如T25加1ml），輕輕晃動使胰酶覆蓋所有細胞。

4. 孵育：室溫消化約2分鐘（時間因細胞而異）。

5. 觀察：在顯微鏡下觀察，直至≥90% 細胞變圓、脫落。若未達到，可每30秒檢查一次。

6. 終止：當細胞充分解離后，立即加入兩倍胰酶體積的預熱的培養(yǎng)基終止消化。

7. 吹打：用移液器輕輕吹打瓶壁，使細胞脫落并分散成單細胞懸液。

8. 離心：將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管，200 × g 離心 3-5分鐘，棄上清。

9. 重懸與接種：用少量新鮮培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，按適當比例稀釋后，接種到新的培養(yǎng)瓶中。

10. 培養(yǎng)：放入培養(yǎng)箱。若使用普通瓶蓋，務(wù)必旋松瓶蓋以利氣體交換。

B. 懸浮細胞傳代

1. 收集與離心：將細胞懸液全部轉(zhuǎn)移至離心管，1000 rpm 離心 5分鐘，棄上清。

2. 重懸：加入1-2ml新鮮培養(yǎng)基，輕柔重懸細胞。

3. 接種：按1:2的比例將細胞懸液傳至新T25培養(yǎng)瓶，并補充總培養(yǎng)基量至5-8ml。

4. 培養(yǎng)：放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

四、 特殊問題處理：運輸中脫落的貼壁細胞

部分貼壁不牢的細胞在運輸中會脫落，屬正常現(xiàn)象，按以下步驟處理：

1. 收集：將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心（1200rpm, 3-5min）棄上清。

2. 清洗：用PBS重懸細胞，再次離心（1200rpm, 3-5min）棄去PBS。

3. 消化：加入約1ml 0.25%胰酶，輕柔混勻（勿劇烈吹打），放入培養(yǎng)箱消化1-2分鐘。

4. 終止與分散：取出后輕輕吹打使細胞團分散，迅速加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化，離心（1200rpm, 3-5min）棄上清。

5. 重懸與接種：加入5ml培養(yǎng)基重懸，按比例接種到新培養(yǎng)瓶/皿中。

6. 觀察：鏡下觀察。若細胞為單顆或僅有3-5個細胞的小團，可正常培養(yǎng)，待其貼壁生長。

大鼠主動脈平滑肌細胞 A7R5

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化) PC-12(低分化)

大鼠β胰島素瘤細胞 RIN-M5F

大鼠脊髓前角運動神經(jīng)元瘤細胞 VSC4.1

大鼠骨肉瘤細胞 UMR-106

大鼠腦I型星形膠質(zhì)細胞 CTX-TNA2

大鼠垂體瘤細胞 MMQ

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化) PC-12(未分化)

大鼠嗜堿性細胞白血病細胞 RBL-2H3

大鼠少突膠質(zhì)前體細胞系 OLN-93

大鼠垂體瘤細胞 GH3

大鼠骨骼肌成肌細胞 L6

正常大鼠腎細胞 NRK-49F

大鼠皮膚成纖維樣細胞 RS1

大鼠肺泡Ⅱ型細胞 RLE-6TN

大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞 AR42J

大鼠小腸隱窩上皮細胞 IEC-6

大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞 C6

大鼠胚胎心肌細胞 H9c2(2-1)

大鼠背根神經(jīng)節(jié)細胞 DRG

大鼠肝癌細胞 H4-II-E-C3

大鼠正常肝細胞 BRL3A

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化) PC-12(高分化)

大鼠空腸膠質(zhì)細胞 EGCCRL-2690

大鼠雪旺細胞 RSC96

大鼠腎小球系膜細胞 HBZY-1

大鼠膠質(zhì)肉瘤細胞 9L/lacZ

大鼠胰島細胞瘤細胞 INS-1

大鼠肝上皮樣干細胞 WB-F344

正常大鼠腎細胞 NRK-52E

大鼠小膠質(zhì)細胞 HAPI

小鼠乳腺癌細胞 AT-3

小鼠肺上皮細胞 TC-1

小鼠鱗狀細胞癌細胞 SCC7

小鼠垂體瘤細胞 AtT-20

小鼠淋巴結(jié)上皮細胞 SVEC4-10

小鼠胚胎纖維細胞 STO

小鼠睪丸間質(zhì)細胞 TM3

小鼠急性骨髓性白血病 C1498

小鼠主動脈血管平滑肌細胞 MOVAS

小鼠黑色素瘤細胞 B16

小鼠乳腺癌細胞 E0771

小鼠樹突狀瘤細胞 DC2.4

小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 RAW264.7

小鼠成纖維細胞 NCTCclone929

小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞株 bend.3

小鼠胚胎成纖維細胞 C3H/10T1/2

小鼠心肌細胞　 HL-1

小鼠腦神經(jīng)瘤細胞 Neuro-2a

小鼠胚胎成纖維細胞 MEF

小鼠腎小管上皮細胞 TCMK-1

小鼠單核巨噬細胞 J774A.1

小鼠胚胎肌母 C2C12

小鼠前脂肪胚胎成纖維細胞 3T3-L1

小鼠肺泡上皮細胞 MLE-12

小鼠乳腺上皮細胞 HC11

小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞株 RGC-5

小鼠結(jié)腸癌細胞株 MC-38

小鼠淋巴瘤細胞(NK靶細胞) YAC-1

小鼠T淋巴瘤細胞（雞OVA基因修飾） E.G7-OVA

小鼠正常肝細胞 NCTC1469

小鼠肺泡巨噬細胞 MH-S

小鼠肺腺癌細胞 LA7120

小鼠腎小球足細胞 mpc-5

小鼠T淋巴細胞 CTLL-2

小鼠主動脈內(nèi)皮細胞 MAEC

正常小鼠睪丸Sertoli細胞 TM4

小鼠淋巴細胞白血病 L1210

小鼠腹水瘤細胞 S-180

小鼠雜交瘤（抗CD2）細胞 OKT11

小鼠小腦細胞 C8-D1A

小鼠睪丸間質(zhì)細胞瘤細胞 MLTC-1

小鼠下丘腦神經(jīng)元細胞 GT1-7

小鼠黑色素瘤細胞 B16-F10

小鼠結(jié)腸癌細胞 CT26.WT

小鼠皮下結(jié)締組織細胞 L Wnt-3A

小鼠血管內(nèi)皮瘤細胞 EOMA

小鼠神經(jīng)干細胞 NE-4C

小鼠胰島β細胞株 Min6

小鼠B細胞淋巴瘤 A20

小鼠肝癌細胞 Hepa1-6

小鼠小膠質(zhì)細胞 Bv-2

小鼠乳腺癌細胞 4T1

小鼠胚胎瘤細胞 ATDC5

小鼠胰腺癌細胞 PANC02

小鼠膠質(zhì)瘤細胞 GL261

小鼠肺癌細胞 LLC

小鼠骨肉瘤成骨細胞 K7M2wt

小鼠乳腺癌細胞 EMT6

小鼠海馬神經(jīng)元細胞 HT22

小鼠小腸內(nèi)分泌細胞系 STC-1

小鼠乳腺上皮細胞 EpH4-Ev

小鼠肝細胞 AML12

小鼠膀胱癌細胞 MB49

小鼠巨噬細胞 Ana-1

小鼠腎小球系膜細胞 SV40-MES-13

小鼠胚胎肝細胞 BNLCL.2

小鼠肥大細胞瘤細胞 P815

小鼠腎癌細胞 Renca

小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細胞瘤瘤株 G422

小鼠骨髓瘤細胞 SP2/0

小鼠精原細胞系 GC-1spg

小鼠腎髓質(zhì)細胞 mIMCD-3

小鼠前列腺癌細胞 RM-1

小鼠宮頸癌細胞 U14

小鼠卵巢癌細胞 ID8

小鼠皮下結(jié)締組織細胞 L-WRN

小鼠胰腺腺泡癌細胞 266-6

小鼠骨髓基質(zhì)細胞　 OP9

小鼠胚胎成骨細胞前體細胞 MC3T3-E1

人子宮頸表皮癌細胞MS751 MS751

小鼠肝癌 H22

小鼠淋巴瘤細胞 EL4

小鼠骨樣細胞 MLO-Y4

小鼠胰島內(nèi)皮細胞 MS1

豬腎傳代細胞 IBRS-2

恒河猴胚腎細胞 FRHK-4